AMV 항목 중에서 특이성(specificity)에 대해 알아보려고 합니다. 특이성이란 무엇인지 알아보고, 특이성 검증을 위한 방법을 알아보겠습니다.
1. 특이성(specificity)의 정의
- 측정하려는 대상 물질을 정확히 인식하고 정량화 할 수 있는지 검증하는 것입니다.
- 특이성이 부족할 경우 다른 보조적인 시험법으로 보완할 수 있습니다.
- 확인 시험, 순도 시험, 정량 시험에서는 특이성이 평가되어야 하며, 입증 방법은 시험법의 목적에 따라 상이합니다.
- 시험 종류(Identification, Purity, Assay)
* 확인: 검체 중 분석대상물질 확인
* 순도: 분석대상물질 중 불순물 함량 측정 필요
* 정량(함량 또는 역가): 분석대상물질의 양 또는 역가 측정
2. 시험법에 따라 특이성 검증을 위한 방법
- 확인 시험
* 한 검체 내 구조적으로 유사한 화합물이 존재하는 경우 이를 식별할 수 있어야 합니다.
* 분석대상물질을 포함한 검체에서 기존의 표준 물질(양성 대조군)과 비교시 양성을 확인합니다.
* 분석대상물질과 유사한 물질(음성 대조군)을 확인하여 반응이 없음을 통해 확인합니다.
* 특정 물질(e.g. 분석대상물질에서 특정 반응을 통해 생성된 물질, 간섭 물질)이 특이성 확인을 방해하는지 확인합니다.
- 순도 시험 & 정량 시험
* 크로마토크래프를 확인하여 증명합니다.
* 검체 내 물질이 충분히 분리되고 있음을 확인하기 위해 피크 간 분리한계를 평가해야 합니다.
* 비특이적 정량 시험에 사용 시 다른 추가적 시험이 필요합니다
* 불순물 표준품 활용 가능 시 검체에 불순물을 포함시키고, 불순물 피크를 확인함으로써 불순물이 분석대상물질에 영향을 주지 않는다고 검증할 수 있습니다.
* 불순물 표준품을 확보하지 못한 경우 불순물 또는 분해생성물을 포함한 검체를 시험한 결과와 다른 시험법으로 시험한 결과(e.g. 약전 시험법, 이미 검증된 다른 시험법, 가혹 조건에 노출되어 분해산물이 있는 검체 등)를 비교하여 검증할 수 있습니다.
3. 실제 사례(Design)
: HPLC를 이용하여 분석하는 불순물(impurity) 시험법인데, 순수한 표준품(pure impurity standards)이 없고, 분리도(resolution) 또한 명확하지 않을 때 특이성(specificity)에 대한 접근방법은?
(1) 특정 불순물(공정 불순물 or degradant)의 확인합니다
- 표준품, 제품, blank, formulation을 강제로 분해하여 특정 불순물을 확인하고 분해된 제품과 비교하여 평가
(2) 분해의 한계(limit of degradation)를 정의합니다
- 불순물 적합 기준과 거의 동일하거나 background noise로부터 구분할 수 있는 최소의 반응점을 시행할 수 있어야 합니다.
(3) 불순물 peak의 순도 확인합니다.
- PDA detectors와 같은 여러 기술을 통해 평가할 수 있습니다.
(4) resolution(peak의 분리 정도)이 불순물 peak를 기준으로 적절한지 확인 후 integration 기준을 평가합니다.
- peak에 해당하는 면적을 계산(integration)하게 되는데, peak가 정확히 분리되지 않으면 부정확한 결과를 얻게 될 수 있습니다.
- 분해도(resolution): HPLC 시험 시 peak가 명확히 구분되는 정도를 뜻함
(5) AMV에 대한 특이성(specificity)을 평가하기 위해 아래 항목을 결합합니다
- limit of degradation
- purity of the impurity peak
- integration 기준을 설정하는 resolution
앞서 설명했다시피 특이성은 분석대상물질을 완벽히 식별할 수 있는지를 확인하기 위함입니다. 항상 가능한 것이 아니기 때문에 필요 수준의 식별성을 위해 다른 추가적인 시험이 필요하기도 합니다.
Reference: ICH Q2 Validation of analytical procedures
감사합니다!